Efeito da Concentração de 2-B-Mercaptoetanol na Extração de DNA de Erythrina Crista-Galli L.

Resumo

A Erythrina crista-galli L., conhecida como corticeira-do-banhado, é uma espécie arbórea de porte médio, característica do bioma Pampa. O interesse por seu cultivo baseia-se na sua utilização ornamental e seu potencial para recuperação de ecossistemas de solos alagadiços, inclusive em áreas de baixas temperaturas. Estudos mostram que o isolamento de DNA total a partir de folhas e câmbio vascular em E. crista-galli indicaram contaminação por polissacarídeos e polifenóis, o que reduz a qualidade do DNA isolado. O 2-β-mercaptoetanol é um reagente antioxidante usado para neutralizar ação desses contaminantes. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo testar diferentes concentrações de 2-β-mercaptoetanol para extração de DNA de Erythrina crista-galli, verificando seu efeito na quantidade e qualidade de DNA isolado. Para esse trabalho foram utilizadas 6 (seis) sementes de E. crista-galli, coletadas no município de Livramento-RS e transportadas para a Universidade Federal do Pampa - Campus São Gabriel, onde foram cultivadas ex vitro até que as plântulas atingissem cerca de 20 cm de altura. Após, uma plântula com aproximadamente 200 mg de cobertura foliar foi selecionada e dividida em 5 (cinco) testes, sendo o controle com kit de extração de DNA (DNeasy Plant Mini Kit) da marca Qiagen seguindo o protocolo do fabricante. Esse kit foi utilizado como controle por se valer de filtros físicos e químicos para remoção das impurezas do DNA. Para as demais amostras, a extração de DNA foi realizada com protocolo CTAB 2% (“Cationic hexadecyl trimethyl ammonium bromide”) com adição de diferentes concentrações de 2-β-mercaptoetanol (0%, 1%, 3% e 5%). O DNA extraído foi quantificado por espectrofotometria utilizando o equipamento Nanoview® e sua qualidade foi verificada por eletroforese em gel de agarose 0,8%. Dentre os protocolos testados para extração de DNA, observou-se através de espectrofotometria, que ao utilizar o protocolo controle (kit Qiagen) e o CTAB 2% (concentração de 3% de 2-β-mercaptoetanol) obteve-se as maiores quantidades de DNA de E. crista-galli, com o total de 37 ng e 47 ng, respectivamente, evidenciando alta concentração de DNA em gel de agarose. Quanto aos protocolos compostos por CTAB 2%, pode-se inferir que a concentração de 2-β-mercaptoetanol tem influencia direta na quantidade de DNA obtida. Isso porque, os protocolos que utilizaram concentrações maiores ou menores que 3% desse reagente obtiveram quantidades inferiores a 22 ng de DNA. Assim, conclui-se que o protocolo de extração de DNA que obtém melhor qualidade e maiores quantidades DNA de E. crista-galli L. é o CTAB 2% com concentração de 3% de 2-β-mercaptoetanol, sendo inclusive, superior ao protocolo controle (kit Qiagen). Este trabalho servirá de base para futuras pesquisas em genética de populações de Erythrina crista-galli L.