Avaliação da eficácia na extração de DNA de Schinus molle L. com adição de diferentes concentrações de 2-B-mercaptoetanol.

Resumo

Schinus molle L. (Anacardiaceae) é uma espécie de árvore perene, dioica, com ocorrência natural no Bioma Pampa, muito utilizada na arborização de ruas e parques. Possui grande importância ecológica por ser crucial na criação de condições ambientais para estabelecimento florestal, além de muito utilizada na indústria farmacêutica por seus óleos essenciais. Estudos genéticos vem sendo desenvolvidos para populações naturais de S. molle, porém em função dos diversos compostos secundários presentes nessa espécie a extração de seu DNA apresenta baixa qualidade. O 2-β-mercaptoetanol é um agente redutor que protege o DNA contra a atividade de enzimas, tais como peroxidases e polifenolodidases, desnaturando-as, deixando o DNA final o mais puro. Este trabalho teve como objetivo testar a adição de diferentes concentrações 2-β-mercaptoetanol no protocolo de extração de DNA e avaliar sua eficiência em Schinus molle. Para esse trabalho foi identificada e coletada uma amostra foliar em população natural de S. molle no município de São Gabriel/RS. Essa amostra foi dividida em 5 (cinco) testes, sendo o controle com kit de extração de DNA  (DNeasy Plant Mini Kit) da marca Qiagen seguindo o protocolo do fabricante. Esse kit foi utilizado como controle em virtude de seus filtros físicos e químicos que ajudam na remoção das impurezas do DNA, servindo como um comparativo de qualidade. Para as demais amostras, a extração de DNA foi realizada com protocolo CTAB 2% (Cationic hexadecyl trimethyl ammonium bromide) com adição de diferentes concentrações de 2-β-mercaptoetanol (0%, 1%, 3% e 5%). O DNA extraído foi quantificado por espectrofotometria utilizando o equipamento Nanoview® e sua qualidade foi aferida por eletroforese em gel de agarose 0,8%. Após as análises no espectrofotômetro, a maior quantidade de DNA de S. molle foi registrada no protocolo de extração CTAB 2% com 0% de 2-β-mercaptoetanol, com um total de 46 ng de DNA. Os resultados nos mostraram que na presença do 2-β-mercaptoetanol, foram obtidas quantidades inferiores a 10 ng de DNA. Com o kit Qiagen às quantidades de DNA ficaram por volta de 5 ng, que apesar do baixo valor apresentou melhor grau de pureza. A eletroforese em gel de agarose corroborou os dados de pureza obtidos mostrando um DNA mais íntegro sem a adição do 2-β-mercaptoetanol. Os resultados alcançados mostraram que o protocolo mais adequado para a extração do DNA de Schinus molle foi o CTAB 2%, sem a presença do 2-β-mercaptoetanol, que interferiu desfavoravelmente na quantidade final desse DNA. Esse trabalho servirá de base para futuras análises em diversidade genética populacional de S. molle.