Desenvolvimento in vitro de Bradyrhizobium japonicum SEMIA 5079 em diferentes condições de pH e fontes de carbono

Resumo

Bradyrhizobium é um gênero de bactérias fixadoras de nitrogênio amplamente utilizados em culturas agronômicas anuais. Em algumas espécies desse gênero, têm-se identificado tolerância a solos ácidos. Contudo, poucos estudos in vitro têm sido desenvolvidos para a caracterização dos mecanismos fisiológicos e genéticos de tolerância. Dessa forma, a determinação de condições ótimas de cultivo in vitro, relacionadas ao pH do meio e à fonte de carbono são necessários, visando o desenvolvimento de protocolos laboratoriais eficientes e de custo reduzido. O objetivo deste trabalho foi avaliar o crescimento in vitro de Bradyrhizobium japonicum SEMIA 5079 em meio líquido utilizando três diferentes fontes de carbono e duas diferentes condições de pH. Colônias de B. japonicum SEMIA 5079 foram cultivadas a temperatura de 30°C, em pH 5,5 ou pH 7,0 em 150 mL de meio de cultura contendo extrato de levedura e Manitol (meio YMAN), Sacarose (meio YSAC) ou Dextrose (meio YDEX) como fonte de carbono. O crescimento bacteriano foi avaliado após 0, 24 e 48 horas de cultivo, através da determinação da densidade ótica em espectrofotometria (OD 560 nm). Todos os experimentos foram realizados em triplicata e as diferenças entre as médias calculadas usando o test-t de Student.  Comparando todas as combinações de pH e fonte de carbono, B. japonicum SEMIA 5079 apresentou maior crescimento em meio YMAN e pH 7,0 após 0 e 12 horas. Contudo, após 24 horas o crescimento em meio YMAN e pH 5,5 foi maior que em pH 7,0 (p = 0.14). O segundo maior crescimento foi observado em meio YSAC/pH 7,0, enquanto em pH 5,5, as culturas nesse meio apresentaram o menor crescimento. Em meio YDEX/pH 5,5, B. japonicum SEMIA 5079 apresentou crescimento equivalente a YSAC pH 7,0 após 0 e 24 horas, apresentando um marcante decréscimo após 48 horas. Esses resultados sugerem que manitol é a melhor fonte de carbono para o cultivo in vitro de B. japonicum SEMIA 5079. Além disso, essa cepa possui alto potencial de crescimento em meio ácido, apresentando considerável crescimento após 48 horas em pH 5.5, sendo indicada para estudos relacionados a cultivo em solos ácidos.